PCR 和 qPCR 有什么区别？

PCR 和 qPCR 有什么区别？

PCR 和 qPCR 都是用于扩增 DNA 特定片段的聚合酶链式反应技术。两者的主要区别在于qPCR 是一种实时方法，而PCR 则不是。

这意味着，使用 qPCR，您可以实时监控目标 DNA 的扩增过程。本文将向您介绍这两种方法，并解释它们之间的主要区别。

什么是 PCR？

PCR（聚合酶链式反应）是 Kary Mullis 在 20 世纪 80 年代开发的一种实验室技术，如今用于从少量 DNA 中生成大量 DNA。

PCR 通常是其他过程中使用的一个步骤，例如 DNA 测序、病原体检测和凝胶电泳。PCR 是一种必不可少的诊断技术，经常用于病毒学、微生物学、寄生虫学、真菌学和牙科等领域。  

聚合酶链式反应 (PCR) 是一种用于复制特定 DNA 片段的方法。该过程从少量模板 DNA 开始，然后由称为聚合酶的酶复制。通过重复加热和冷却循环可以增加复制的数量，这会将 DNA 链分开，以便再次复制。

PCR 的最终产物是目标 DNA 序列的大量相同副本。此产物随后可用于进一步分析，例如测序或Southern印迹。PCR 还可用于从 mRNA 模板分子中制备 cDNA。

什么是 qPCR（实时 PCR）？

定量聚合酶链式反应 (qPCR 或定量 PCR) 与 PCR 非常相似，但它还允许您量化样本中存在的目标 DNA 量。qPCR 涉及添加在扩增过程中与目标 DNA 结合的荧光染料或探针。这些探针在受到激光激发时会发出不同波长的光。

通过测量每个波长发射的光，您可以确定在扩增开始之前样本中存在多少目标 DNA。qPCR 还可用于通过测量荧光随时间的增加来实时监测扩增进度。

什么是逆转录 PCR？

逆转录 PCR (RT-PCR) 是一种 PCR，用于从 mRNA 模板分子生成 cDNA。RT-PCR 通常用于检测和量化 RNA 病毒，例如 HIV 和丙型肝炎病毒。

要进行 RT-PCR，首先需要使用逆转录酶将 mRNA 模板逆转录为 cDNA。然后可以使用 PCR 扩增目标 cDNA 序列。RT-PCR 是一种非常灵敏的方法，可用于检测样本中极低水平的 RNA 病毒。

qPCR 具有测量基因表达的能力。在基因表达中，读取 DNA 片段时会合成 mRNA，然后使用 mRNA 产生蛋白质。

在逆转录过程中，逆转录酶可用于创建互补 DNA (cDNA)，该互补 DNA 将是所研究 RNA 的副本。然后对 cDNA 进行 qPCR，以准确测量产生的量。

RNA 既可用于 PCR，也可用于 qPCR，如果 RNA 用于 PCR，则称为 RT-PCR，如果 RNA 用于 qPCR，则称为 qRT-PCR。  

PCR 和 qPCR 之间的差异

PCR 和 qPCR 的主要区别在于 qPCR 是一种实时方法，而 PCR 不是。这意味着使用 qPCR，您可以实时监控目标 DNA 的扩增过程。

这两种方法的另一个区别是 qPCR 需要使用荧光染料或探针，而 PCR 则不需要。这些探针可让您量化样本中存在的目标 DNA 量。

PCR 和 qPCR 的应用和用途

聚合酶链反应

PCR 是一种相对简单的过程，可以检测DNA 的存在与否。PCR用于许多不同的领域，包括法医学、医学和生物技术。它经常用于扩增小片段 DNA 以进行测序或其他下游应用。

PCR 还可用于从 mRNA 模板分子生成 cDNA。

定量PCR

qPCR 提供测量反应速率的实时数据，提供有关任何给定时间样本中存在的 DNA 数量的信息，本质上，它能够测量基因表达的速率。

在分子生物学中，这有助于了解蛋白质合成，从而了解健康和疾病中的生物途径。实时或 qPCR 可用于检测基因表达、病原体和 RNA 的存在和数量，以及验证 DNA 微阵列结果和环境应用。  

qPCR 具有高通量和更宽动态范围的优势，因为它可以检测同一孔内广泛的表达水平。由于其多路复用功能（可在同一实验中扩增多个目标）、高通量和快速结果，因此运行起来更经济。 

逆转录聚合酶链反应

RT-PCR 是一种 PCR，用于从 mRNA 模板分子生成 cDNA。RT-PCR 通常用于检测和量化 RNA 病毒，例如 HIV 和丙型肝炎。

PCR 和 qPCR 都是具有多种不同应用的重要方法。

用于 PCR 和 qPCR 的设备

有许多不同类型的设备可用于 PCR 和 qPCR。最常用的设备是热循环仪，用于加热和冷却样品以进行 DNA 扩增。

其他常见设备包括逆转录酶、荧光染料或探针和激光器。根据具体应用，您可能还需要其他类型的设备。

PCR 和 qPCR 是许多不同领域中必不可少的方法。通过了解它们之间的主要区别，您可以为您的特定应用选择最佳方法。

结论

总之，PCR 和 qPCR 都是用于扩增 DNA 特定片段的方法。

然而，qPCR 是一种实时方法，可让您实时监控目标 DNA 的扩增，而 PCR 则不能。最终，这两种方法都可用于生成目标 DNA 序列的多个副本以供进一步分析。

qPCR是扩增、表征、定量和分析核酸的最佳选择。与荧光染料一起使用，它非常适合与光学技术一起使用，因此必须使用优质、清晰的微孔板和封板膜。 

PCR还用于扩增和检测短 DNA 序列，以便进行后续分析，例如凝胶电泳。微孔板和封板膜不需要透明，因为 PCR 不用于光学应用。

建议选择质量优良、长期、可靠耐用的微孔板。

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